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浙江东方基因生物制品股份有限公司

Zhejiang Orient Gene Biotech Co.,LTD

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荧光定量PCR

定量PCR服务


荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广泛应用。 荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时监控反应过程。随着PCR 反应的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号,这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,结合相应的软件对产物进行分析,可以得到荧光扩增曲线,计算待测样品初始模版的量。实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃,运用该项技术,可以对DNA、RNA样品进行相对定量、绝对定量和定性分析。


检测分类


1. mRNA表达量水平检测:相对定量法。
2. MicroRNA表达量水平检测:通过设计特殊茎环结构的反转录引物,结合实时定量PCR可以精确检测微量样品中microRNA表达水平。内参基因一般用U6 
3. 基因拷贝数检测:如检测样品中不同细菌含量、基因工程菌目的基因拷贝数、环境中耐药基因检测等。采用绝对定量法。


检测分类


1. mRNA表达量水平检测:相对定量法。
2. MicroRNA表达量水平检测:通过设计特殊茎环结构的反转录引物,结合实时定量PCR可以精确检测微量样品中microRNA表达水平。内参基因一般用U6 
3. 基因拷贝数检测:如检测样品中不同细菌含量、基因工程菌目的基因拷贝数、环境中耐药基因检测等。采用绝对定量法。


检测方法

1. SYBR Green Ⅰ法:
        PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

 


2. TaqMan探针法:
        探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。


提供结果


引物和探针及序列,胶图,原始数据(包括扩增曲线和熔解曲线)、数据分析结果及实验报告。


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